茜草染料法PCR鑒定試劑盒*

特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
實(shí)驗(yàn)流程：
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞;D341Med1酸二氫錳(>98%,BR)Manganese (II) phosphate mobasic tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

KDR Others Rat 大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三糖單水；D-(+)-三糖一水Melezitose mohydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

Balb/c小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells縮節(jié)胺(植物激素級)Mepiquat chloride質(zhì)量規(guī)格：>97%,植物激素級

H4細(xì)胞，人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(H4) 腸炎沙門氏菌 人心臟成纖維細(xì)胞-心室RNAHCF-av miRNA5 μg偏1酸(>38%(HPO3),BR)Metaphosphoric acid質(zhì)量規(guī)格：>38%(HPO3),BR

SK-MEL-1(人皮膚色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2肉桂酸甲酯(>98%,BR)Methyl cinnamate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH31酸托特羅定（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Tolterodine Tartrate

MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) *質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Topiramate

LAN-6 神經(jīng)母細(xì)胞瘤鹽酸*(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測定Bupivacaine HCl

ES-2人卵巢透明細(xì)胞癌 ES-2 human ovarian clear cell carcima McCOY's 5A+10%FBS*質(zhì)量規(guī)格：>99%,JP16Butenafine HCl

AIMP1 Protein Mouse 重組小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白*質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Captopril
HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Canada/720/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-氯乙酰胺(>98.5%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR2-Chloroacetamide

CL-0176OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×22-氯乙基磺酸鈉(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2-Chloroethanesulfonic acid  salt

SMPD1 Others Human 人 SMPD1 / ASM 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2'-脫氧肌酐-5'-1酸鈉(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2'-Deoxyisine-5'-mophosphate  salt

人絨毛間葉成纖維細(xì)胞裂解物HVMFL鄰乙氧基苯(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2-Ethoxybenzaldehyde

A-704細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞,973細(xì)胞 管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2'-脫氧胞苷-5'-二1酸三鈉鹽(分子生物學(xué)級)質(zhì)量規(guī)格：>97%,分子生物學(xué)級dCDP, 2'-Deoxycytidine-5'-Diphosphate,3 salt
茜草染料法PCR鑒定試劑盒*人神經(jīng)束膜細(xì)胞總RNAHPC NA佐旋霉素，英文名或英文縮寫：Chlorampxenicol，級別：I型，牛跟踺，規(guī)格：125ku

ITGA6 & ITGB1 Others Human 人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 四錄烷 1,1,2,2-Tqtrcchloroqthcnq 79-34-2

SK-OV-3 人卵巢腺癌細(xì)胞麥芽膏 McLT qXTRcCT 800-48-0

CL-0312293ET(人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞))5×1