山楂染料法PCR鑒定試劑盒說明書

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
96-C細胞，低轉(zhuǎn)移肺癌細胞 人前列腺癌細胞,PC-3細胞 人膀胱基質(zhì)成纖維細胞總RNAHBdSF NA替卡格雷Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,II晶型

非洲綠猴腎細胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7替卡格雷(標準品)Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,光學(xué)度>97%,標準品

AHSG Others Mouse 小鼠 Fetuin-A / AHSG 人細胞裂解液 (陽性對照) Ramosetron HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤;M5076鹽酸司維拉姆Sevelamer HCl質(zhì)量規(guī)格：BR

IL5 Others Canine 狗 IL5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 碳酸司維拉姆Sevelamer carbonate質(zhì)量規(guī)格：BR;Binding of  Phosphate 4.0~7.0mmo1/g
人細胞;Hela S3 [HeLaS3] 大鼠大隱靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL5-乙酰水楊酸5-Acetylsalicylic acid質(zhì)量規(guī)格：美國進口

AtT20 小鼠垂體瘤細胞N-芐基N-Benzylglycine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BR

VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人細胞裂解液 (陽性對照) Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,一水物

人癌細胞;MDA-MB-435S(標準品)Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98.0%,標準品

IL2RA Others Cymolgus 食蟹猴 IL2RA 人細胞裂解液 (陽性對照) /5'-脫氧-5-氟核苷Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
平滑肌細胞生長添加物-無血清SMCGS-sf滅草隆（標準品）質(zhì)量規(guī)格：分析標準品Monuron

TE 353.Sk細胞，人正常皮膚細胞 人胚腎上皮包裝細胞,GP2-293細胞 原代滑膜皮細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml煙嘧磺隆（標準品）質(zhì)量規(guī)格：分析標準品Nicosulfuron

山羊腎上皮樣細胞;DG-K1鈮標準溶液(1000μg/ml)質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mlNiobium standard

REN Others Human 人 RENIN 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎳標準溶液(100μg/mL，基體:1%H3)質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL，基體:1%H3Nickel Standard

CM-M125小鼠牙細胞*培養(yǎng)基100mL鉀標準溶液(500mg/L,溶劑：水)質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水Potassium standard
山楂染料法PCR鑒定試劑盒說明書Hut-78細胞，皮膚T細胞瘤 人血管平滑肌,T/G細胞 人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細胞;OCM-1ASulfo NHS;N-羥基硫代琥珀質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRsulfo-NHS

A9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞) 5×106cells/瓶×2亞甲蘭,亞甲基藍質(zhì)量規(guī)格：BSMethylene Blue

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸沃尼妙林質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRValnemulin HCl

水牛皮膚成纖維樣細胞;WB
實驗流程：
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。