ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。
 

　　1.　試劑
 

　　(1)　包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸餾水至1000ml
 

　　(2)　洗滌緩沖液(PH7.4PBS)：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO4·12H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸餾水至1000ml
 

　　(3)　稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
 

　　(4)　終止液(2MH2SO4)：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
 

　　(5)　底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml　0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml　加蒸餾水50ml。
 

　　(6)　TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
 

　　(7)　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液(PH5.5)1ml　3%H2O2　2μl
 

　　(8)　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
 

　　(9)　正常人血清和陽性對(duì)照血清。
 

　　2.　器材:
 

　　(1)　聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
 

　　(2)　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
 

　　(3)　4℃冰箱，37℃孵育箱。