OD全稱optical density，也就是光密度，也可以稱為吸光度。吸光度指的是利用物質(zhì)有的吸收光譜，來鑒別物質(zhì)或者測定物質(zhì)的含量，也就是將一束特定波長的光通過被檢測物，被檢測物可以將光吸收掉一部分，通過吸光度計(jì)算被檢測物的濃度。一般被檢測物濃度越高，吸光度的值就會越高。實(shí)驗(yàn)中也是利用“OD值”和被檢測物的濃度之間的關(guān)系來根據(jù)吸光度。
 

　　OD值是用酶標(biāo)儀測定的，其范圍一般在0-3之間，也有高于3.0的，其值的大小跟孔中顏色的深淺成比例，一般顏色深，OD值就比較高，另外ELISA所測定的OD值反應(yīng)的結(jié)果一般是一定稀釋度的抗體效價(jià)，如果你所用的抗體稀釋度很小，效價(jià)很高的話，其OD值是會很高的。
 

　　實(shí)驗(yàn)中OD值偏低情況分析：
 

　　第一種情況，整體的OD值偏低
 

　　可能情況分析：
 

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)問題，標(biāo)準(zhǔn)濃度有沒有提高的潛力，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式等
 

　　2. 顯色試劑問題，顯色試劑是否新鮮，是否污染
 

　　3. 檢測抗體，檢測抗體效價(jià)是否OK，保存方法是否合適，稀釋液中不含有蛋白質(zhì)，基質(zhì)中有影響酶活的物質(zhì)等
 

　　4. 體系中是否有其他影響抗原抗體結(jié)合的物質(zhì)
 

　　5. 孵育條件是否正確
 

　　6. 洗滌不能過猛，洗滌過猛也可能會造成顯色偏低
 

　　第二種情況，標(biāo)準(zhǔn)曲線OK，樣本的OD值很低
 

　　情況概述：操作步驟全按照要求，樣本信息也適用，樣本類型血清，標(biāo)曲OK，但就是樣本的OD值很低，不在曲線范圍內(nèi)。
 

　　可能情況分析：
 

　　1. 一般標(biāo)曲OK，試劑盒基本沒有質(zhì)量問題，這個(gè)時(shí)候先去分析樣品和保存方法的原因。
 

　　2. 樣品是否新鮮，小愛之前看到很多論壇大咖建議用新鮮樣品檢測，將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后加入血清或血漿中檢測(也就是血清進(jìn)一步稀釋標(biāo)準(zhǔn)品)，觀察檢測結(jié)果，判斷是否是血清中有未知物質(zhì)影響。
 

　　3. 血清中成分復(fù)雜，標(biāo)準(zhǔn)蛋白的稀釋液成分簡單，血清中可能有450nm顯色物質(zhì)與板底非特異結(jié)合，或者有些非特異結(jié)合抗體的蛋白，不能洗干凈，所以本底比標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋液高。
 

　　4. 適當(dāng)延長顯色時(shí)間。
 

　　5. 更換酶標(biāo)儀，排除儀器原因。
 

　　6. 聯(lián)系我們，嘗試其他方法。