HCMEC/D3永生化人腦微血管內皮細胞

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培 養條件新配制的培養基來培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

MTHFR： 亞甲基四氫還原酶MTHFR抗體 CM-R022大鼠甲狀腺上皮細胞培養基100mL

IFNA8 Protein Human 重組人 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 標簽) 大鼠胰α2A(AMY2A)ELISA試劑盒 HSV- I IgM 單皰疹Ⅰ型病毒 IgM(捕獲法二步法)

MEK1： MEK1/MAPKK1抗體 PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠主動脈內皮細胞培養基 100mL 大鼠胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒 HSV- II IgG 單皰疹Ⅱ型病毒 IgG(間接法二步法)

MTNR1B： 褪黑素受體1B抗體 Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 牛腎細胞,MDBK細胞 Hs 578Bst(人成纖維細胞)

HCA57： 肝癌相關抗原57抗體 CL-0381MDA-MB-175VII(人導管癌細胞)5×106cells/瓶×2

BE(2)C細胞，人神經母細胞瘤細胞 乙型溶血性鏈球菌 人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1 人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2/CXCL-2)ELISA 試劑盒 PSD-95 突觸后密度蛋白95(抗原) 0.5mg

Complement C3： 補體C3抗體 HA Others H11N2 甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)

人慢性髓系白血病細胞;K562 人巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA 試劑盒 BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 癌易感基因2抗原 0.5mg

H1N1 Hemagglutinin 2： 甲型流感病毒血凝素抗體 人胚肺二倍體細胞;HEL-2

HCMEC/D3永生化人腦微血管內皮細胞小鼠腦膜細胞(MMC)(5×105) CNE1, 人鼻咽癌細胞系 Human 大鼠黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒 apo-B100(Mouse apoprotein B100)  小鼠載脂蛋白B100 96T

PKC mu： 蛋白激酶C mu型抗體 溶液P/S

VEGFA Protein Human 重組人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白 大鼠核轉錄因子κBP65(NFκBp65)ELISA試劑盒 ATMA/TMAB(Human Anti-Thyroid Microsome Antibody)  人抗甲狀腺微粒體抗體 DPP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人細胞裂解液 (陽性對照)

J82 人膀胱移行細胞癌 大鼠核轉錄因子κB(NFκB)ELISA試劑盒 25(OH)D3/25 HVD3(Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3)  小鼠25羥基維生3 96T

Pepsinogen II： 原C抗體 Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]細胞，人肝癌細胞 人胚腎細胞(亞系克隆),FIP293細胞 胎兒表皮角化細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)